Desarrollo y aplicación de un nuevo marcador molecular para listeria monocytogenes"multilocus sequence typing". Análisis de la estructura poblacional de la especie

Resum

Multilocus sequence typing" (MLST) constituye un nuevo marcador molecular recientemente desarrollado para varias especies bacterianas. Este método genotípico de aislados bacterianos hace uso de la secuenciación genética para caracterizar a los alelos presentes en diferentes genes no sometidos a presión selectiva, implicados en el metabolismo bacteriano (genes housekeeping). La acumulación de cambios de nucleótidos en estos de genes es un proceso relativamente lento y por lo tanto el perfil alélico estable a lo largo del tiempo. Por otra parte el análisis de secuencias genéticas tiene un alto poder de discriminación y permite el intercambio y la comparación objetiva de resultados entre distintos laboratorios vía Internet. Estas características hacen este método especialmente adecuado para realizar estudios epidemiológicos a largo plazo así como para analizar la estructura poblacional de las poblaciones bacterianas. El desarrollo de MLST para Listeria monocytogenes se llevó a cabo empleando una muestra genéticamente heterogénea de 84 aislados en la que los serotipos 4b, 1/2a, 1/2b y 1/2c estuvieron representados. Esta muestra fue elegida a partir de 360 aislados de origen clínico y alimentario previamente caracterizados mediante electroforesis en campo pulsado (PFGE). Así mismo este análisis permitió identificar los diferentes clones que circulan y producen casos de listeriosis en nuestro país. La congruencia en las relaciones filogenéticas establecidas a partir de ambos tipos de análisis validó el esquema de MLST desarrollado. Los resultados de MLST confirmaron la existencia de dos divisiones genéticas principales y mostraron una población con una estructura básicamente clonal. No obstante, los índices de asociación alélica y las secuencias genéticas obtenidas, indicaron la existencia de procesos de intercambio genético a lo largo de la evolución de la especie. Estos datos sugieren que L.monocytoge