Caracterización de la regulación molecular del sistema de transporte de citrato de lactococcus lactis

Resumen

Este trabajo experimental se ha centrado en la caracterización de la regulación molecular del sistema de transporte de citrato de Lactococcus lactis subsp.lactis biovar diacetylactis. El trabajo de investigación ha incluido el estudio de: 1,- La regulación de la expresión del operón citQRP a nivel transcripcional y posttranscripcional. 2,- La influencia del transporte y metabolismo de citrato en la fisiología y metabolismo bacteriano. Los estudios del transcrito y de los fragmentos de ARN generados pro la acción de ribonucleasas fueron complementados con: 1,- Manipulación genética del operón citQRP para realizar estudios fisiológicos con bacterias portadoras de las construcciones obtenidas. 2,- Detección de metabolitos del citrato por la técnica de resonancia magnética nuclear en la estirpe natural L.diacetylactis CRL264 en distintas condiciones fisiológicas. 3,- Detección de las proteínas CitQ y CitR mediante síntesis de ARN (transcipcción) y de las proteínas codificadas (traducción) in vitro. Los resultados obtenidos nos han permitido demostrar que la expresión del sistema de transporte de citrato se induce a nivel trasnscripcional por estrés de pH. Esta inducción permite la supervivencia de L.diacetylactis a pH ácidos y conlleva una activación del sistema de transporte, que resulta en un eficiente cometabolismo de azucares y citrato y contribuye a la homeostasis del pH intracelular de lactococcus. Así mismo, el ARNm CitQRP es procesado en una compleja estructura secundaria (estructura I) tanto en L.diacetylactis como en E.coli. Este procesamiento afecta drásticamente al plegamiento de la especies de ARN-3' generadas, provocando un exposición del resto de estructuras del ARN a la actividad de exo y endoribonucleasas. En E.coli, el ARNm cit es procesado en la estructura I por la Rnasa E (procesamiento mayoritario) y por la Rnasa III (porocesamiento minoritario). En L.diacetylactis, se ha d