Obtención y caracterización de derivados inmovilizados de extracto celular a agrobacterium radiobacter en quitina y quitosano

Resumen

En esta tesis se ha obtenido un biocatalizador inmovilizado a partir de un extracto celular de Agrobacterium radiobacter para la síntesis de un D-aminoácido de interés industrial, la p-hidroxifenilglicina (p-HPG). El extracto celular contiene dos actividades enzimáticas, D-hidantoinasa y D-carboamilasa, que transforman el sustrato de partida, la p-hidroxifenil-hidantoina, en el producto final, p-hidroxifenilglicina. Como soportes para la inmovilización, se han utilizado polímeros de origen natural; quitina y quitosano obtenidos a partir de deshechos de la industria pesquera y alginato de origen comercial. Se han ensayado tres métodos de inmovilización, la inmovilización coavalente, por adsorción y la encapsulación. En los dos primeros, se ha estudiado el efecto de las características físico-químicas de la quitina y del quitosano. En el tercer método, se han preparado complejos polielectrolitos de alginato-quitosano en los que se ha estudiado el efecto del modo de preparación y de las características del quitosano empleado (peso molecular y grado de acetilación). En todos los métodos ensayados, se han obtenido derivados que presentan ambas actividades enzimáticas y por tanto válidos para la síntesis de p-HPG. En todos los casos, los derivados se han optimizado modificando distintas variables de la reacción, tamaño de soporte. Los derivados optimziados se han caracterizado con respecto al efecto de la temperatura y pH en su actividad y estabilidad, reutilización y estabilidad durante el almacenamiento. De los soportes estudiados, la quitina ha dado mejores rendimientos que el quitosano tanto en la inmovilización covalente como en la inmovilización por adsorción. De las quitinas estudiadas la obtenidas a partir de caparazón de gambas (Ploeticus mülleri) y de langostino (Penaeus caramote) han presentado los rendimientos más elevados. Los derivados obtenidos por adsorción o por enalce no son