Caracterización de la proteína oligomérica de la matriz de cartílago. Expresión del dominio c-terminal

Résumé

La Proteína Oligomérica de la Matriz del Cartílago (COMP), conocida también como trombospondina 5, es una glicoproteína con una elevada masa molecular (520 kDa). Es una proteína altamente aniónica debido a su elevado contenido en Asp/Asn y Glu/Gln, que constituyen más del 30% del total de sus residuos. Se trata de un homopentámero constituido por cinco subunidades idénticas, cada una de ellas con una masa molecular de aproximadamente 120 kDa. Cada una de estas subunidades consta de: * Un dominio globular carboxilo terminal. * Siete dominios de unión a calcio o repeticiones tipo 3. * Cuatro dominio de tipo EGF o repeticiones tipo 2. * La región N-terminal. Inicialmente se aisló y purificó la COMP a partir de cartílago aticular humano. A partir de esta proteína purificada se obtuvieron anticuerpos policlonales anti-COMP humana en conejos. Se produjeron también anticuerpos monoclonales anti-COMP humana en ratón, y estos anticuerpos fueron de gran utilidad parala detección de COMP humana en fluidos biológicos (líquido sinovial y suero) de pacientes con osteoartritis en rodilla. No está determinada completamente la funcionalidad biológica de la COMP, pero al dominio que se le ha atribuido alguna función ha sido al dominio globular carboxilo terminal. Por tanto decidimos expresar el fragmento C-terminal en tres sistemas de expresión tales como: E.coli, Pichia pastoris y baculovirus. De los tres sistemas de expresión, sólo P.pastoris nos permitió obtener el dominio C-terminal completamente puro.