Caracterización de la vía del NO/GMPC en neuronas granulares de cerebelo de rata en cultivo durante el desarrollo. Regulación por nmda

Resumen

La hipótesis de este trabajo de investigación es que las enzimas que participan en la vía del NO/GMPc en neuronas granulares de cerebelo de rata pueden estar sujetas a un mecanismo de regulación de sus niveles de actividad y cantidad de proteína, que dirigía una expresión diferencial en el transcurso del desarrollo. La estrecha relación existente entre los receptores de NMDA y la isoforma NOS I supone la posibilidad de una vía de modulación de la actividad y expresión de estas proteínas mediante compuestos farmacológicos que actúan a través de estos receptores (agonistas y antagonistas). Hemos caracterizado la expresión de las proteínas implicadas en la vía del NO/GMPc en el cerebelo de rata y en la neuronas en cultivo comprobando, no sólo la existencia de todas las proteínas de la vía objeto de estudio, sino un patrón de expresión diferencial de esta proteínas en el transcurdo del desarrollo. Además el tratamiento prolongado con NMDA produce un claro incremento de la actividad de la GCs estimulada con un donador de NO exógeno, el DEA/NO, y un aumento del mensajero de las subunidades que constituyen esta proteína. Hemos profundizado en el estudio del mecanismo molecular responsable de la regulación de la subunidad a2 de la GCs, poniendo de manifiesto que el NMDa aumentaba la estabilidad del mensajero de la subunidad a2, que hasta ese momento no había sido clonada, la cual presenta múltiples secuencias ricas en uracilo relacionadas con la unión a proteínas implicadas en la estabilización/desestabilización de mensajeros como AUF1 y HuR. Finalmente demostramos que el tratamiento con NMDA disminuye la expresión de AUF1 de forma significativa a través de un mecanismo dependiente de PKG.