Estudio de las propiedades estructurales de proteínas virales implicadas en la transmisión de potyvirus por pulgones

Zusammenfassung

En el presente trabajo se aborda el estudio de las propiedades funcionales y estructurales de la proteína HC-Pro implicada en la transmisión de potyvirus por pulgones. El mecanismo molecular de transmisión parece basarse en la interacción entre dos proteínas virales denominadas proteína de la cápsida (CP) y factor de adquisición (HC-Pro), así como entre el HC-Pro y el estilete del pulgón, de modo que el HC-Pro actuaría a modo de "puente" entre la partícula viral y el vector. Se ha empleado un nuevo sistema de expresión heteróloga, como es la levadura metilotrófica P.pastoris, para la expresión de la proteína HC-Pro de TEV. Dicha proteína es capaz de interaccionar in vitro con viriones de TEV purificados a partir de planta infectada así como de mediar en la transmisión de TEV por pulgones, siendo el primer sistema heterólogo que permite obtener una proteína HC-Pro funcionalmente activa. Con el fin de incrementar la pureza de la proteína hisHC-Pro de TEV obtenida a partir de planta infectada, se utilizó una columna de NTA-níquel y diferentes sistemas de elución. Se analizó el comportamiento del hisHC-Pro de TEV obtenido con cada uno de los tapones de elución en transmisión, se determinó la cantidad de níquel presente en cada uno ellos, así como el posible papel desempeñado por el níquel en la transmisión de TEV por pulgones. Poco se sabe hasta el momento de la relación existente entre las propiedades estructurales de la proteína y su función durante el proceso de transmisión. Partiendo de una proteína hisHC-Pro de TEV que presentaba una actividad en transmisión próxima al 100%, se analizó el comportamiento de la proteína en solución mediante experimentos de ultracentrifugación analítica y se procedió a su reconstrucción tridimensional a partir de las imágenes obtenidas por microscopía electrónica. Las estructuras obtenidas por ambas metodologías son compatibles con el dímero, el te