Vacunas frente a la neosporosis bovinauso de cepas transgénicas e identificación de nuevas dianas

Resumen

N. caninum, parásito formador de quistes, es el agente etiológico de la neosporosis bovina, considerada una de las principales causas de fallo reproductivo de origen transmisible y causante de importantes pérdidas económicas en los rebaños a nivel mu ndial. Actualmente, la inmunoprofilaxis se erige como la mejor alternativa económica para el control de la enfermedad, sin embargo no existe una vacuna eficaz y su obtención presenta diversas dificultades. Por un lado, el empleo de vacunas vivas ha m ostrado los mejores resultados en el desarrollo de inmunidad protectora, pero conlleva problemas de seguridad. Por otro lado, las vacunas de nueva generación han resultado ser las más seguras, sin embargo, los resultados de inmunoprotección son insuf icientes. Cabe destacar que, para el desarrollo de nuevas preparaciones vacunales frente a la neosporosis bovina, resulta interesante el empleo de herramientas capaces de interferir en dos procesos claves en la patogenia de la enfermedad como son: i. la transformación del estadio de taquizoíto al de bradizoíto que conduce a la persistencia del parásito en el hospedador, y ii. el ciclo lítico desarrollado por el estadio de taquizoíto, durante el cual el parásito invade las células hospedadores, s e multiplica y se disemina por el organismo. En la presente Tesis Doctoral, para evitar el problema de la seguridad de las vacunas vivas, se trató, en primer lugar, de obtener cepas que mostraran una persistencia reducida (Capítulo II). De este modo, se generaron dos clones distintos de parásitos transgénicos, denominados Nc-1 SAG4c1.1 y Nc-1 SAG4c2.1, capaces de expresar la proteína específica de bradizoíto NcSAG4 en el estadio de taquizoíto mediante técnicas de genética reversa. Este abordaje fue llevado a cabo bajo la hipótesis de que la expresión temprana de esta proteína podría estimular una respuesta inmune que produjera la eliminación progresiva de los bradizoítos, evitando el establecimiento de la fase crónica de la infección. Las d os cepas transgénicas y la originaria, Nc-1 WT, exhibieron las mismas tasas de proliferación y conversión de taquizoíto a bradizoíto en ensayos en cultivos celulares. Sin embargo, la cepa transgénica Nc-1 SAG4c1.1 presento una tasa de invasión in vit ro significativamente menor que las otras dos. Al evaluar la persistencia de las cepas en un modelo murino cerebral, se observó una detección del parásito significativamente menor en el cerebro de los ratones inoculados con las cepas transgénicas dur