Caracterización de secuencias variables en cultivo de tejidos en centeno

Résumé

Mediante la técnica de RAPD se ha detectado una banda, denominada F13c, que variaba en el patrón de amplificación de todas las plantas regeneradas albinas no ocurriendo lo mismo en las plantas verdes regeneradas de la misma línea celular. El análisis de la secuencia de F13c indica que presenta similitud con secuencias relacionadas con retrotransposones. Al analizar, mediante PCR inversa, un fragmento de 7 Kb correspondiente a las regiones adyacentes a esta secuencia se comprueba que se trata de una secuencia mitocondrial. Se ha comprobado, empleando la técnica de PCR cuantitativa, el incremento del numero de copias de F13c y otras dos secuencias mitocondriales de centeno (coxIII y atpA) en plantas albinas y en callos, observándose que en estos casos existe un aumento general del número de moléculas de DNA mitocondrial. Hemos analizado la presencia de esta secuencia en genomas de especies relacionadas filogenéticamente con centeno. Se han usado especies de la familia Poaceae, estudiando preferentemente el grupo perteneciente a la tribu Triticeae. Este análisis parece indicar que este fragmento se integró en la mitocondria al principio de la evolución de la subfamilia podrían haber perdido esta secuencia. Al utilizar esta secuencia para inferir relaciones citoplásmicas dentro de la subfamilia Pooideae mediante tres métodos distintos (distancia, parsimonia e inferencia Bayesiana) se comprueba que la tasa de sustitución nucleótidica es muy baja y que, en este caso, las inserciones y deleciones en la secuencia F13c resultan informativa filogenéticamente. Se ha puesto de manifiesto la utilidad de secuencias mitocondriales no codificadoras para establecer relaciones evolutivas entre especies próximas. Además se ha detectado la presencia de heteroplasmia mitocondrial en las especies analizadas dentro de esta subfamilia.