Aportación de las técnicas moleculares al diagnóstico de citomegalovirus en el receptor de trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos

Resumen

El Citomegalovirus (CMV) es el agente oportunista con mayor morbi-mortalidad en el receptor de trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos. A pesar de los avances en las últimas dos décadas en cuanto a estrategias preventivas y métodos diagn ósticos, se producen reactivaciones en el 40-50 de los pacientes CMV seropositivos a pesar del uso de profilaxis antiviral y casos de enfermedad por CMV en el 2-8 de los mismos. El objetivo de este estudio es conocer el comportamiento de dos PCR a tiempo real (rtPCR) entre sí, así como en relación a las técnicas de referencia en este trabajo (antigenémia pp65 y Cobas TNAI), si son técnicas válidas para realizar la vigilancia virológica de la infección por CMV en TPH alogénico, si permiten obte ner un valor umbral de la carga viral para establecer el inicio del tratamiento anticipado, si podemos conocer la cinética de replicación viral, así como la monitorización de la respuesta al tratamiento antiviral. Se diseña un estudio retrospectivo, de los pacientes 71 trasplantados TPH alogénicos en el Hospital Universitario de la Princesa desde Enero de 2007 hasta Febrero de 2009, se recogen las muestras de plasma de todos los episodios de replicación viral por CMV y se conservan congeladas a -80 C. Todos ellos son seropositivos para CMV, ya sea el donante, el receptor o ambos y reciben profilaxis antiviral con Aciclovir o Valaciclovir a altas dosis. Se obtienen un total de 395 muestras de plasma, correspondiendo a 51 episodios de infecci ón por CMV en 32 pacientes TPH alogénicos. De ellos en 6 pacientes (8,4 ) se desarrolla enfermedad por CMV, neumonitis en dos casos y colitis en los 4 restantes. Del resto de los pacientes, 5 no recibieron tratamiento anticipado y no evolucionó a enf ermedad y a los 23 restantes se les administró terapia antiviral con Ganciclovir, Valganciclovir o Foscarnet. Las técnicas utilizadas para el manejo de estos pacientes son la antigenémia pp65 y la PCR convencional cuantitativa, comercial Cobas Amplic or CMV Monitor (Roche Diagnostics SL) realizando la extracción de ADN automatizada mediante el uso de Cobas AmpliPrep (Cobas-TNAI). Los límites de detección son 2 PMN/ 10 5 para la antigenémia pp65 y 600 copias de ADN /ml de plasma para la PCR Cobas- TNAI. Retrospectivamente se realizan dos PCR a tiempo real comerciales y automatizadas en todo su procedimiento, sobre las mismas muestras de plasma: Qia CMV LC Kit (Qiagen) con la extracción de ADN automatizada en el sistema m2000sp de Abbott (qiaCM