Aplicación de la pcr cuantitativa en el diagnóstico microbiológico de patógenos periodontales

Résumé

Los avances en el desarrollo de técnicas de biología molecular, en especial de la PCR (reacción en cadena de la polimerasa), han permitido su aplicación en el ámbito diagnóstico. La reciente aparición de técnicas de cuantificación en tiempo real mediante PCR ha revolucionado las palicaciones diagnósticas de dicha técnica. La cuantificación de aquellas bacterias involucradas en la aparición de la periodontitis podría aporta una informaicón diagnóstica de clara utilidad. OBJETIVO Optimizar y validar la técnica de PCR cuantitativa en tiempo real mediante SYBR Green y sondas TaqMan para la detección de A.actinomycetemcomitans (Aa), P.gingivalis (pg) y T.forythensis (Tf) en placa subgingival. MATERIAL Y MÉTODOS Partiendo de cepas de tipo, se realizó la optimización de SYBR Green para Aa y Pg, y de sondas TaqMan para las tres especies. Se utilizaron primers frente a secuencias de genes de copia única y se empleó un método físico para la extracción de DNA. Se aplicó el sistema TaqMan en 92 muestras procedentes de individuos con salud, gingivitis y periodontitis, las cuales fueron también cultivadas para llevar a cabo la comparación entre ambos métodos. RESULTADOS Ambos sistemas de PCR en tiempo real proporcionan una sensibilidad, especificidad y reproducibilidad adecuadas tras la optimización. Al comparar PCR y cultivo, se obtuvo una clara divergencia en la prevalencia de Tf, con un 100% de positivos en periodontitis mediante PCR. Hubo gran concordancia en la cuantificación de las muestras positivas por ambas técnicas, aunque con valores mayores para cultivo en el caso de Pg, y a la inversa en Tf. CONCLUSIÓN La PCR cuantitativa en tiempo real es un método sensible, específico y reproducible para la detección de los tres patógenos periodontales en muestras subgingivales.