Proteomic analysis of human vessels. Application to atherosclerosis (análisis proteómico de las paredes vasculares humanas. Aplicación al estudio de la enfermedad de aterosclerosis)

Zusammenfassung

La Aterosclerosis es una enfermedad crónica normalmente resultado de la respuesta inflamatoria del organismo en la que las células que forman parte de la pared arterial, células musculares lisas y células endoteliales en mayor medida, interactúan con lipoproteínas y células inflamatorias (macrófagos y linfocitos T) derivando en la formación de la placa de atheroma. Debido al enrome potencial que el análisis proteómico parece presentar, la electroforesis bidimensional (2DE) y Espectrometría de Masas (EM) fueron seleccionadas como la "maquinaria" esencial para este análisis, con el objeto de entender qué ocurre, a nivel proteico, en el desarrollo de la enfermedad aterosclerótica. En el transcurso de esta tesis se han considerado dos estrategias diferentes. En un principio se planteó el estudio del proteoma de algunos de los componentes de la placa , entre ellos las células endoteliales, que fueron tratadas con agentes proinflamatorios (IL-1beta) con objeto de caracterizar aquellas proteínas, expresadas en estas células sometidas a condiciones inflamatorias, que podrían estar directamente implicadas en la formación posterior de la placa de atheroma. Posteriormente, la posibilidad de trabajar directamente con placa de ateroma extraída mediante endarterectomía carotídea, permitió estudiar, mediante análisis proteómico, el secretoma d la placa de ateroma. Mediante esta metodología exvivo, hemos demostrado, en primer lugar, que las placas de ateroma cultivadas in vitro son capaces de secretar proteínas al medio, pudiendo ser detectadas mediante 2DE. La mayoría de estas proteínas eran secretadas en mayor intensidad en presencia de placa de ateroma en comparación con los segmentos arteriales tomados como controles. Además, los niveles de secreción eran mayores en aquellas regiones en los que se detectaba una mayor progresión de la patología. En el caso de las células endoteliales, la mayoría de las proteínas de