Proteínas de reserva de mostaza amarilla y 1,3-beta-glucanasa de polen de olivo como modelos de estudio de proteínas alergénicas

Zusammenfassung

El trabajo de investigación presentado en esta Tesis Doctoral está enfocado hacia el estudio y caracterización de proteínas alegénicas de mostaza amarilla y polen de olivo. En concreto se ha llevado a cabo la caracterización estructural e inmunológica de los dominios N- y C-terminal de Ole e 9, alergenos principal de polen de olivo con actividad 1,3-beta-glucanasa, para lo que ambos dominios se produjeron de forma recombinante en la levadura P.pastoris y se purificaron a homogeneidad. Se ha demostrado que las 1,3-beta-glucanasas están implicadas en procesos de reactividad cruzada entre pólenes, alimentos vegetales y frutas y se ha establecido con modelo de ratón alérgico a Ole e 9 en el que se ha ensayado un tratamiento profiláctico con los fragmentos recombinantes. Además se ha iniciado un estudio de mapeo epitópico del C-terminal de Ole e 9 y se ha analizado la relevancia clínica de ambos dominios recombinantes. Por otro lado, se ha producido la forma precursora de Sin a 1, alergeno principal de mostaza amarilla, en la levadura P.pastoris lo que ha permitido analizar sus propiedades estructurales e inmunológicas y compararlas con las de la forma natural. Este estudio ha permitido proponer que la proteína recombinante podría ser utilizada como marcador de sensibilización a mostaza. Además se ha aislado e identificado un nuevo alergeno de mostaza de alto peso molecular. Se trata de una globulina 11S, denominada Sin a 2, que se ha caracterizado estructural e inmunológicamente. Finalmente, se ha clonado el cDNA que codifica para Sin a 2 y analizado las propiedades de dicha secuencia.