Terapia génica de la deficiencia de piruvato quinasa

Resumen

La deficiencia en Piruvato Kinasa Eritrocitaria humana (hRPK), un desorden autosómico recesivo producido por mutaciones en el gen PKLR, es una de las causas más comunes de anemia hemolítica crónica no esferocítica. La expresión transgénica de la RPK en precursores eritropoyéticos deficientes puede resultar una terapia alternativa en aquellos pacientes con síntomas severos. En este trabajo hemos construido vectores retrovirales que expresan el cDNA de la hRPK y la eGFP en un único RNA mensajero, separados por un IRES eucriótico (SF11RPXEG). Líneas celulares murinas 3T3 y MEL (Células de eritroleucemia murina ) y humanas HeLA y 293T fueron transducidas con sobrenadantes retrovirales infectivos. Análisis de western-blot y de FACS demostraron la expresión estable de EGFP y hRPK, respectivamente, con expresión estable del transgén durante más de 20 semanas en cultivo. La expresión de los trasngenes no varió significativamente durante el tiempo del cultivo. Además, la inducción a eritrodiferenciación de células MEL no modificó la expresión de hRPK ni de eGFP. Posteriormente, progenitores hematopoyéticos Lin-Sca-1+ fueron transducidos in vitro con SF11RPKXEG y transplantado s en receptores normales letalmente irradiados. Tres meses post-transplante, una elevada expresión de hRPK y eGFP fue observada en leucocitos, plaquetas y eritrocitos maduros. Estos resultados indican que los vectores retrovirales pueden ser una sistema efectivo para abordar la corrección fenotípica de los defectos eritropoyéticos asociados a la deficiencia de Piruvato Kinasa Eritrocitaria humana mediante de protocolos de terapia génica.