Acilación de proteínascaracterización de la palmitoil-transferasa humana dhhc6

Abstract

La palmitoilación de proteínas es una modificación postraduccional que, debido a su carácter reversible, permite regular de forma dinámica la localización y actividad de las proteínas en la célula. En la presente tesis se ha estudiado el papel de la palmitoilación tomando como modelo la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS) y se ha profundizado en la caracterización de DHHC6, miembro de una familia de proteínas con actividad palmitoil-transferasa. En primer lugar, se diseñaron quimeras amino- terminales de la eNOS fusionadas a GFP y se analizó su asociación a membranas en general y a subdominios de baja densidad en particular en función de su grado de acilación. Asimismo, se determinó que la eNOS se palmitoila en su tránsito hacia la memb rana plasmática siendo dicha palmitoilación parcialmente inhibida por drogas que afectan a la integridad del aparato de Golgi. En la segunda parte del trabajo se describió la miristoilación y palmitoilación de DHHC6, así como su localización subcelul ar, asociación a membrana y topología. Se estudió la actividad palmitoil-transferasa de DHHC6 sobre una colección de proteínas palmitoiladas de diversos tipos, encontrándose que H-Ras era un sustrato de la enzima. La palmitoilación de H-Ras por parte de DHHC6 resultó ser dependiente de la acilación de ésta, y conducía a una mayor asociación de H-Ras a membrana, así como a un aumento en su capacidad de unir GTP y activar a sus efectores.