Desarrollo de nuevos sistemas para la producción de proteínas de fusión por fermentación

Résumé

Con el desarrollo de la biología molecular, la producción de proteínas en sistemas heterólogos ha cobrado gran importancia en el campo de la biotecnología. La posibilidad de purificar e inmovilizar estas proteínas recombinantes representan una ventaja importante para su aplicación en procesos industriales o en el desarrollo de productos biotecnológicos. Por ello, el uso de polipéptidos de afinidad, más conocidos como tags, que proporcionan características determinadas a las proteínas de fusión es una tecnología ampliamente utilizada tanto en investigación básica como en procesos industriales. En esta Tesis se ha trabajado con dos sistemas muy ventajosos que permiten purificar e inmovilizar proteínas de fusión en soportes sólidos utilizando dos tipos de tags: - El ChBD, tag de afinidad que reconoce colina y otros compuestos análogos, permiten purificar en un único paso de cromatográfico utilizando un soporte muy económico, la DEAE-celulosa. Además ofrece la posibilidad de inmovilizar dichas proteínas en papel de DEAE-celulosa manteniendo su funcionalidad. - BioF, un nuevo tag diseñado en esta Tesis, que permite obtener proteínas de fusión inmovilizadas en gránulos de polihidroxialcanoato de cadena media, un soporte sólido biodegradable y biocompatible conocido como bioplástico. Las proteínas de fusión asociadas a estos gránulos pueden purificarse con ellos mediante una sencilla centrifugación y, si es necesario, liberarse en solución mediante tratamientos suaves. En esta Memoria se han determinado distintas características de dichos tags se han diseñado las herramientas biotecnológicas necesarias para su utilización. Además se han realizado proteínas de fusión que demuestran la funcionalidad de ambos tags. Entre las proteínas obtenidas, es relevante destacar, por su interés industrial, la DAO-ChBD, con actividad D-aminoácido oxidasa y la ChBD-Pyr, con actividad pirofosfatasa. También se