Determinantes y efectos de la integración de la proteína sp-b del sur-factante pulmonar en membranas lipídicas

Resumen

El trabajo que alberga la presente tesis pretende avanzar en el conocimiento de los mecanismos moleculares que permiten que un surfactante pulmonar sea activo, a través de los cuáles las proteínas y membranas del surfactante se integran para modular la fisiología respiratoria. Este trabajo se centra en el estudio de la proteína SP-B, que es esencial e insustituible para el correcto funcionamiento del surfactante. La carencia de SP-B es letal, de lo que deriva su interés científico implicado en la búsqueda del entendimiento de los mecanismos moleculares a través de los cuales podríamos explicar la capacidad de SP-B de interaccionar con los distintos lípidos del surfactante, de promover la formación de la película interfacial y su implica ción en múltiples actividades del metabolismo y ensamblaje del surfactante pulmonar. Se ha abordado la caracterización estructural de la proteína SP-B madura porcina en diferentes entornos de membrana. Esta aproximación se ha hecho mediante espec troscopía de fluorescencia en estado estacionario y fluorescencia resuelta en el tiempo. Se pretende analiza la disposición de la SP-B en membranas, preferencia por diferentes fases lipídicas o diferentes especies fosfolipídicas. Además se estudia la posible interacción de la proteína SP-B con la otra proteína hidrofóbica del surfactante pulmonar, la SP-C. Se analiza la capacidad de remodelación de membranas por parte de la proteína SP-B madura porcina. En este trabajo se ha analizado el efe cto que esta proteína presenta sobre la capacidad de las vesículas de fusionarse y formar bicapas soportadas planas sobre superficies de óxido de silicio, dicho efecto se ha monitorizado con la técnica de QCM-D (del inglés Quartz Cristal Microbalance with Dissipation). Finalmente se describe la optimización de la expresión y purificación de formas recombinantes del precursor de SP-B a partir de bacterias. El posterior estudio estructural y funcional en condiciones fisiológicamente relevan tes añadirá más información del ensamblaje de SP-B en los complejos del surfactante pulmonar en trabajos futuros.