Implicación del dominio pres en el proceso infectivo del virus de la hepatitis b

Résumé

Los dominios preS aislados del virus de la hepatitis B son capaces de interaccionar con vesículas de fosfolípidos ácidos, teniendo lugar un cambio conformacional en la proteína como consecuencia de dichas interacción. El objetivo del presente trabajo es determinar la posible implicación de las diferentes zonas del dominio preS1 en las primeras etapas del ciclo infectivo del HBV. Para ello, se han obtenido cinco proteínas mutantes del dominio preS1 del HBV, en las que se han eliminado 40 aminoácidos a lo largo de la secuencia, y se han caracterizado espectroscópicamente mediante fluorescencia y dicroísmo circular, comprobando que en todos los casos mantienen la estructura poco ordenada y con alto porcentaje en estructura beta típica de la proteína completa. Todas estas proteínas son capaces de insertarse en el interior de la matriz lipídica de vesículas de DMPG. Además, se ha estudiado la interacción de las proteínas con vesículas de fosfolípidos ácidos, PG, y se ha visto que producen, en mayor o menor medida, los efectos de agregación y desestabilización de vesículas observadas con el dominio preS1. Además, se ha obtenido el dominio preS del DHBV con una extensión de 6 residuos de histidina en su extremo carboxilo-terminal. El método empleado permite la purificación de 15-20 mg de proteína/L de cultivo con un alto grado de pureza. Se ha caracterizado la proteína mediante técnicas espectroscópicas y se ha estudiado su interacción con vesículas de fosfolípidos, comprobando que tanto su estructura como un comportamiento es similar al descrito para el dominio preS del HBV, a pesar de la escasa homología de secuencia, lo que pone de manifiesto la implicación de esta región en las etapas iniciales del ciclo infectivo de los hepadnavirus. Se ha obtenido el dominio preS del DHBV miristoilado. El método de purificación empleado permite obtener 6 mg de proteína/L de cultivo con un alto grado de pureza,