Mecanismo de regulación transcripcional mediana por copg en el promotor pcr del plásmido pmv158

Resumen

Este trabajo experimental se ha centrado en la caracterización de del mecanismo de regulación transcripcional mediada por el represor CopG en el promotor Pcr del plásmido pMV158.El trabajo de investigación ha incluido el estudio de: 1)los complejos DNA-proteína formados entre la RNA polimerasa de Escherichia coli y/o CopG,y el promotor Pcr, mediante ensayos de retraso en gel y ensayos de protección y 2)caracterización del DNA operador de CopG mediante la construción de operadores mutantes.Todos los operadores han sido analizados mediante ensayos de protección frente a radical hidroxilo y metilación con DMS y 3)caracterización de la unión de CopG a su DNA operador mediante la estimación de la constante de afinidad y la constante de disociación relativa. Los resultados obtenidos nos han permitido demostrar que la proteína CopG regula la actividad del promotor Pcr en dos puntos diferentes del proceso de iniciación de la transcripción:i)inhibe la unión de la RNA polimerasa, y ii)la expulsa de su sitio de unión incluso cuando la polimersa está asentada en el promotor.Además se ha caracterizado el papel de las regiones que constituyen el operador de CopG, y su influencia en la unión de la proteína al DNA.La proteína se une con alta afinidad y cooperatividad a su DNA diana, características de unión esenciales para poder realizar su función de represor transcripcional.