Eficacia y seguridad de vectores lentivirales en la terapia génica de enfermedades hematológicas hereditarias

Zusammenfassung

Estudios previos han demostrado que la terapia génica es una alternativa eficaz para el tratamiento de diferentes enfermedades hematológicas monogénicas. Sin embargo, en protocolos de terapia génica realizados en pacientes inmunodeficientes SCID-X1 con vectores gamma-retrovirales se han observado efectos adversos de oncogénesis insercional. Este suceso supuso una decepción muy grande, y la terapia génica cambió de objetivos hacia el estudio de vectores virales más seguros, con menor capacidad d e generar oncogénesis insercional. Por otro lado, existen estudios en los que integraciones gamma-retrovirales por sí solas iniciaban una expansión clonal de células madre hematopoyéticas en receptores trasplantados (Kustikova et al., 2005; Kustikov a et al., 2007). Estos resultados podrían limitar las conclusiones previas derivadas del marcado genético con gamma-retrovirus. Por ello, nuestro primer objetivo fue investigar la seguridad de los vectores lentivirales y si células marcadas genéticamente con estos vectores poseían una ventaja proliferativa. Para ello utilizamos un modelo de hematopoyesis humana en ratones NOD/SCID y de hematopoyesis de ratón mediante la realización de trasplantes seriados. Del análisis de los receptores concluimos que las células madre hematopoyéticas con integraciones lentivirales no generaban ventaja proliferativa frente a las células sin transducir. El estudio de los sitios de integración mediante LAM-PCR, en el modelo de hematopoyésis de ratón, reveló que los clones que repoblaron los receptores cuaternarios no portaban integraciones cercanas a genes involucrados en autorenovación celular y el porcentaje de genes RIS que fueron diana del provirus fue pequeño. Por tanto, los vectores lentivirales ofrecen ventajas frente a los vectores gamma-retrovirales en relación a eficacia y seguridad. Como segundo objetivo nos planteamos el desarrollo un nuevo vector lentiviral para la terapia génica de pacientes con anemia de Fanconi del subtipo A. El vector propuesto expresa el gen hFANCA bajo el control del promotor interno hPGK (fosfoglicerato quinasa humana). Demostramos la capacidad de este vector de revertir el fenotipo de células derivadas de pacientes con anemia de Fanconi subtipo A y su funci onalidad tras la restauración de la proteína FANCA en la ruta de las proteínas de Fanconi. Nuestros resultados mostraron que los vectores lentivirales no modificaban las propiedades de repoblación de las células madre hematopoyéticas, confirmando...