Desarrollo y aplicación de un ensayo fenotípico basado en retrovirus recombinantes para el estudio de sensibilidad del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) a fármacos antirretrovirales

Resumen

En este trabajo se describe el diseño de un sistema de expresión de genes del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) basado en la producción de retrovirus recombinantes de un único ciclo de infección. Los retrovirus recombinantes incorporan la mayor parte de la secuencia gagpol procedente de aislados de pacientes, obtenida a partir de plasma mediante transcripción inversa y reacción en cadena de la polimerasa, y el gen de la luciferasa. Para su producción se ha empleado un nuevo vector de expresión basado en VIH, envolturas heterólogas y sistemas de transfección transitoria optimizados. El sistema ha sido adaptado y aplicado para el estudio de la sensibilidad de cepas de VIH a los fármacos antirretrovirales inhibidores de la proteasa y de la trancriptasa inversa, y podría ser aplicado al estudio de la sensibilidad a los inhibidores de la integrasa. La utilización clínica del ensayo ha sido evaluada con cepas de VIH control y procedentes de pacientes, analizando la sensibilidad frente a compuestos con patrones de mutaciones de resistencia bien definidos, siendo compatibles los resultados con el estudio genotípico y la evolución clínica. Se ha evaluado la capacidad del ensayo para predecir la respuesta al tratamiento con lopinavir, un fármaco de reciente incorporación en la clínica, encontrándose que los pacientes con un incremento de la concentración inhibitoria 50 menor de cuatro veces la de un virus de referencia sensible tienen significativamente más probabilidad de alcanzar carga viral indetectable. El sistema puede ser adaptado para el estudio de la sensibilidad a fármacos antirretrovirales en laboratorios clínicos y para el estudio de otros aspectos de la infección VIH, como el tropismo.