Regulación de los canales nav1.5 y kv1.5.papel de las quinasas y de las subunidades beta

Résumé

En la presente Tesis Doctoral se han analizado los efectos de distintas quinasas o procesos fisiológicos (proliferación y diferenciación) sobre la expresión y función de canales iónicos y subunidades accesorias, y se ha identificado el complejo de se ñalización del canal Kv1.5. Para ello, se han utilizado dos líneas celulares diferentes: a) para el estudio de la regulación por quinasas de la interacción de los canales Kv1.5 con las subunidades Kvbeta1.3, células HEK293 y b) para el estudio de la regulación de los canales de sodio durante la diferenciación y la proliferación, mioblastos de rata L6E9. Se han utilizado técnicas de electrofisiología (configuración de célula entera de la técnica de fijación de voltaje en parches de membrana) y técnicas de biología molecular. Los resultados del primer bloque demuestran que la activación de la proteína quinasa C (PKC) no es necesaria para que se produzca el ensamblaje del canal Kv1.5 con la subunidad Kvbeta1.3. Además, se identifica un complej o proteico funcional o ¿canalosoma¿ formado por: Kv1.5, Kvbeta1.3, la proteína de anclaje de las PKC activadas o RACK1, y la PKCbetaII. Los resultados obtenidos en el segundo bloque demuestran que los mioblastos obtenidos en una fase temprana de dife renciación adoptan un fenotipo cardíaco y que la expresión de los canales Nav1.5 subyace como mecanismo molecular responsable de dicho proceso. Además, durante la diferenciación de estas células se produce un aumento en la expresión de las subunidades Navbeta1-3, mientras que el patrón de expresión de la subunidad Navbeta4 no se modifica.