Caracterización funcional y localización de receptores muscarínicos en la cara luminal del epitelio cólico de rata

Resumen

Los receptores de membrana acoplados a proteínas G (GPCR), y en concreto los receptores muscarínicos desempeñan un papel fundamental en la regulación funcional de las células epiteliales intestinales. El paradigma clásicamente aceptado sobre el modelo de secreción iónica propone una distribución asimétrica de los receptores muscarínicos, cuya expresión funcional está restringida a la membrana basolateral de las células epiteliales involucradas en la secreción de cloro. Recientemente se ha demostrado la presencia de receptores muscarínicos tanto en la cara basolateral, como en la cara apical de células epiteliales de riñón. Estos experimentos plantearon la posibilidad de que también existieran receptores muscarínicos en la cara apical del epitelio cólico, dada la similitud existente entre ambos tejidos. El objetivo de este trabajo es estudiar la presencia de receptores muscarínicos en la cara apical del epitelio cólico, mediante estudios electrofisiológicos y técnicas inmunohistoquímicas. Con los experimentos electrofisiológicos se puede obtener, la corriente de cortocircuito (Isc) que proporciona una medida del movimiento iónico activo a través de las membranas del epitelio. Estos estudios fueron realizados en ratas Sprague-Dawley macho. Éstas se sacrificaron en una cámara cerrada con exceso de CO2; se extirparon los 5 cm distales de colon, manteniéndolo en isquemia fría con una solución de Ringer, hasta el comienzo del experimento. Una vez montados en las cámaras Ussing modificadas, se sustituyó la solución Ringer fría por solución Ringer a 37º C, con oxigenación continúa. Los procedimientos utilizado s en los experimentos electrofisiológicos se describen a continuación: 1) Se trataron las muestras del colon con carbacol (Cch) 100 microM (análogo a la acetilcolina) por la región basolateral para compararlo con los controles no sometidos a tratamiento. 2) Se estudió la acción del Cch 100 microM en el lado mucoso del colon para contrastarlo con los controles no tratados. 3) Se trató las muestras del colon añadiendo Cch 100microM por la región apical sumergidos en una solución Ringer sin Cl- par...