Respuesta de candida albicans tras su interacción con el macrófagoanálisis proteómico y estudio de marcadores de apoptosis

Résumé

C. albicans es un hongo patógeno oportunista que forma parte de la microbiota normal. En individuos sanos se mantiene un equilibrio entre las defensas del huésped y la capacidad de infección de la levadura, pero en situaciones de inmunosupresión puede causar diferentes tipos de infecciones que van desde candidiasis superficiales en piel y mucosas hasta candidiasis invasivas. Debido al importante papel que tienen los macrófagos en el control de la infección por C. albicans y eliminación de este agente patógeno, en el presente trabajo nos planteamos profundizar en el estudio de la interacción C. albicans-macrófago para poder complementar estudios previos realizados por nuestro grupo de investigación. Para ello se llevaron a cabo diferentes a bordajes: (1) estudios de expresión diferencial de proteínas de C. albicans mediante electroforesis 2D-PAGE convencional utilizando el ratio macrófago-levadura 1:5, (2) estudios de expresión diferencial de proteínas mediante la tecnología 2D-DIGE con el ratio macrófago-levadura 1:1 y (3) estudio de marcadores de apoptosis en la levadura tras su interacción con el macrófago con el fin de demostrar la hipótesis generada previamente. Este estudio reveló que la levadura responde modulando la expresión de diversas proteínas implicadas en diferentes procesos biológicos como el metabolismo y energía, transporte celular, respuesta a estrés oxidativo, biogénesis de componentes celulares y destino proteico, además de proteínas de función desconocida . Estos cambios en la expresión de proteínas reflejan un intento de adaptación por parte de la levadura al ambiente hostil en el que se encuentra en el interior del fagosoma. Esta respuesta varía dependiendo del ratio macrófago-levadura utilizado en los estudios de interacción. El análisis de redes de interacción de genes/proteínas de C. albicans con proteínas implicadas en apoptosis descritas en la literatura, reveló la existencia de señales tanto apoptóticas como anti-apoptóticas en la leva dura tras 3 horas de interacción con el macrófago. Además, pudimos confirmar nuestra hipótesis previa de muerte por apoptosis de C. albicans tras su interacción con el macrófago a distintos tiempos, mediante el estudio de varios marcadores: fragmenta ción del DNA, producción de ROS, actividad caspasa, condensación de la cromatina y fragmentación nuclear, marcadores típicos de una célula apoptótica. Por otro lado, para profundizar en los estudios proteómicos, es importante analizar subproteomas.