Diagnóstico y control de especies de "Aspergillus" productoras de ocratoxina A

Resumen

La ocratoxina A (OTA) es un metabolito secundario con propiedades neurotóxicas, inmunotóxicas, genotóxicas y teratogénicas sobre animales, y además ha sido clasificada por la Agencia Internacional de Investigación del Cáncer como un posible canceríge no en humanos (del grupo 2B). Las principales especies de Aspergillus productoras de OTA son A. ochraceus en la sección Circumdati, y A. carbonarius y los dos miembros del agregado A. niger (A. niger y A. tubingensis), en la sección Nigri. Se ha obs ervado presencia de OTA en numerosos alimentos y bebidas, especialmente en cereales, café, uvas y vino, y sus límites máximos en diversos productos alimentarios están regulados por la Unión Europea. Para minimizar la entrada de OTA y otras micotoxina s en la cadena alimentaria, es muy importante la obtención de herramientas de diagnóstico rápido, para poder monitorizar los puntos críticos de control de forma efectiva. Sin embargo, el reconocimiento de las numerosas especies del género Aspergillus es difícil y requiere expertos en taxonomía, ya que tradicionalmente se han empleado métodos basados en características morfológicas. En este trabajo se describen ensayos, basados en la técnica de PCR, para la detección de las especies A. carbonariu s, A. niger, A. tubingensis, A. japonicus, A. ellipticus, A. heteromorphus, A. ochraceus y A. flavus, y dos ensayos de PCR a tiempo real para la especie A. carbonarius usando SYBR Green I y sonda TaqMan. Todos los cebadores están diseñados mediante l a comparación de secuencias de la región espaciadora intergénica multicopia del rDNA, ITS, en diversas cepas y especies de Aspergillus, y han sido ensayados en un gran número de aislamientos de diferentes orígenes y hospedadores. Los ensayos de PCR s on rápidos, sensibles y específicos, y representan una buena herramienta para la detección temprana de algunas de las principales especies de Aspergillus toxígenas, y para la prevención de la entrada de micotoxinas en la cadena alimentaria. Además, l os protocolos descritos anteriormente fueron aplicados en la detección de especies de Aspergillus en dos importantes agro-productos, como son las uvas de vino y los cereales (trigo blando y cebada). Por otra parte, se ha llevado a cabo la identificac ión y caracterización de genes implicados en la ruta biosintética de OTA en las especies A. ochraceus y A. carbonarius, y se ha cuantificado la expresión de algunos de estos genes en relación con la producción de OTA mediante RT-PCR a tiempo real...