Nueva estrategia de tipado en neisseria meningitidispolimorfismo y fragmentos de restricción del gen por-a

Resumen

En la tesis se desarrolla un protocolo de PCR-RFLP para tipado de Neisseria meningitidis basado en la amplificación y posterior restricción del gen porA. Las proteínas codificadas por el mismo (PorA) permiten clasificar a este microorganismo en distintos serosubtipos y a su vez, permiten realizar la caracterización antigénica del mismo, necesaria para el control de brotes epidémicos y desarrollo de futuras estrategias de control. Para el desarrollo del protocolo se analizaron un total de 388 cepas correspondientes a los diferentes serosubtipos. Para validar los resultados obtenidos por nuestra técnica se procedió a la secuenciación del gen porA en un alto porcentaje de las cepas. La alta variabilidad de este gen, ha obligado a desarrollar un algoritmo consistente en una digestión secuencial con varias enzimas de restricción que van desembocando en la identificación de los diferentes subtipos. El desarrollo de este método lleva asociado la utilización de un algoritmo que permite utilizar una nomenclatura compatible con las utilizadas clásicamente. Para analizar el nivel de tipabilidad de este protocolo se analizaron 95 cepas no serosubtipables (NSTs) obtenidas mediante anticuerpos monoclonales (Acms), obteniéndose con nuestra técnica, un porcentaje de cepas con subtipo no definido menor que el porcentaje generado de cepas NSTs por Acms. Esta mejora permite un conocimiento más amplio de la distribución de los distintos subtipos en una determinada región geográfica. Se trata de un método alternativo a las metodologías utilizadas clásicamente en el subtipado, como son los Acms y el genosubtipado, con problemas de accesibilidad y alto coste económico, respectivamente. Por tanto, este tipo de estrategia podría permitir que la boratorios con recursos reducidos puedan realizar la caracterización antigénica de este microorganismo.