Estudio de la ruta catabólica del estireno de pseudomonas sp. Y2

Résumé

El estireno es uno de los compuestos aromáticos de mayor uso industrial, lo que supone un importante riesgo de contaminación medioambiental. Algunos microorganismos, como Pseudomonas sp.Y2, son capaces de mineralizar este compuesto generando exclusivamente CO2 como producto final. Este trabajo se centra en el aislamiento y caracterización de los genes responsables de la degradación del estireno de Pseudomonas sp.Y2. Para ello se ha realizado una librería genética del cromosoma de esta bacteria en un vector plasmídico, de la que se a obtenido un clon que alberga un plásmido que contiene todos los genes implicados en los primeros pasos de la degradación del estireno. La secuenciación de los 15560 pb de bases que constituyen el inserto de este plásmido, y el análisis de la secuencia obtenida con programas informáticos especializados, ha permitido definir la existencia de cuatro genes catabólicos, styABCD, que codifican tres actividades enzimáticas responsables de la oxidación secuencial del estireno, generando expoxiestireno, fenilacetaldehído y finalmente ácido fenilacético. Los experimentos realizados han confirmado la funcionalidad de estas actividades enzimáticas tanto en Pseudomonas sp.Y2 como en otros microorganismos, a los que dota de la capacidad de eliminar este contaminante. Se ha estudiado en profundidad el sistema que regula la transcripción de los genes styABCD, codificado en dos genes, stySR, que conforman un sistema de dos componentes en el que StyS es el encargado de detectar la presencia de estireno y de transferir la señal, mediante la fosforilación de un residuo específico, a StyR. Esta última proteína es un regulador transcripcional que interacciona directamente con el promotor de los genes estructurales, activando su expresión. El conocimiento obtenido en este trabajo ha permitido la construcción de estirpes modificadas de Pseudomonas sp.Y2 que permiten valorar la presencia de agentes contaminan