Análisis estructura-función de prfa, el regulador central de la virulencia de listeria

Resumen

La mayor parte de los genes de virulencia descritos hasta el momento en Listeria monocytogenes están sometidos a una regulación positiva coordinada a través de la proteína PRfA, un factor de transcripción que presenta homologías estructurales con la proteína receptora de AMPc de Escherichia coli, más conocidad como Crp o CAP. En este trabajo nos hemos aproximado al estudio estructura-función de PrfA a través de la identificación y análisis de mutaciones que afectan a la actividad de esta importante proteína de L.monocytogenes, esencial para la virulencia y la patogénesis del proceso infeccioso. Hemos identificado dos nuevas mutaciones PrfA*, Ile45Ser y Leu140Phe, que al igual que la mutación Gly14Ser previamente descrita, resultan en la expresión constitutiva de elevados niveles de factores PrfA-dependientes en condiciones normalmente represoras para las cepas silvestres de L.monocytogenes. Estas sustituciones se localizan en regiones de PrfA con un alto grado de conservación respecto de las regiones homólogas de Crp y en las que mapean mutaciones de naturaleza y efectos similares. Por analogía con Crp y su mecanismos alostérico de activación por AMPc, estas mutaciones mimetizarían en PrfA los cambios conformacionales inducidos por la unión de un hipotético cofactor activador, todavía por identificar, y que resultarían en la exposición del motivo hélice-giro-hélice responsable de su unión específica a la secuencia diana de DNA. Además de las mutaciones PrfA*, hemos identificado a partir de una cepa de genotipo prfA* (Gly145Ser) una mutación de PrfA, Glu173Gly, idéntica y localizada en la misma posición en las proteínas alineadas que una mutación Crp*sup (Glu171Gly) que anula el efecto activador de la sustitución Crp* Ala144Thr (a su vez localizada en una posición alineada exactamente con la de la mutación PrfA* Gly145Ser). Todas estas observaciones constituyen una clara evidencia de que PrfA no sólo e