Bases genéticas y fisiológicas de la inmunidad a la microcina b17 un péptido inhibidor de la replicación del dna de entero-bacterias

Resumen

La microcina b17 (mccb17) es un antibiótico peptídico de 3255 d. Que inhibe la síntesis del DNA provocando su degradación. Es sintetizada y excretada por cepas de e.Coli que portan el plásmido pmccb17 de 70 kb. Estas cepas son inmunes a la mcc que producen. Los determinantes para la síntesis de la mcc se han localizado en un fragmento de 3.3 kb de dicho plásmido. En este se localizan 4 cistrones el 1 de ellos (gen mcba) es el gen estructural del antibiótico. En esta tesis se realiza el estudio de la inmunidad a la mccb17 (inm). Hemos localizado la región de inm en un fragmento de 2.1 kb contiguo a la región de síntesis de la mcc. Posteriormente se identificaron los genes implicados se secuenciaron y se visualizaron sus productos. Son tres genes adyacentes que hemos denominado mcbe y mcbg cuyos productos tienen 241 254 y 187 a.A. Respectivamente. Así mismo se ha evaluado la contribución de cada gen en la determinación de la inmunidad y se ha estudiado el posible papel de la inm en la producción del antibiótico. Hemos encontrado que existen dos mecanismos de inm y que se requieren ambos para determinar una inm óptima. El primer mecanismo lo determinan los genes mcbe y mcbf y consiste en la evacuación al exterior de la mcc intracecular. En consecuencia se requieren estos genes para la producción del antibiótico (formación de halos antibiosis). El segundo mecanismo consistiría en la neutralización funcional de la mcc no evacuada. Además en esta memoria se presenta y describe un vector de clonaje de selección directa o positiva.