Inestabilidad estructural de plásmidos asociada a funciones replicatías y a expresión de cloramfenicol acetiltransferasa

Resumen

Se ha construido un plásmido híbrido (pjs37) constituido por pls1 (que confiere resistencia a tetraciclina) y pc194 (que confiere resistencia a cloramfenicol). Dicho hibrido ha mostrado inestabilidad estructural condicionada a la presencia de cloramfenicol en el medio. Este fenómeno ha permitido establecer un sistema de selección positiva para la obtención de mutaciones plasmídicas que confieren una ventaja selectiva al huésped. La presencia del replicón de pls1 en pjs37 ha permitido realizar un estudio comparativo, tanto de la inestabilidad de pjs37 como de la expresión del gen cat (determinante de la resistencia a cloramfenicol) de pc194, entre los sitemas de streptococcus pneumoniae, bacillus subtilis y escherichia coli. Así, se han podido seleccionar plásmidos delecionados de pjs37 en estos tres sistemas bacterianos. Se ha podido demostrar que la ventaja selectiva conferida al huésped por los derivados delecionados de pjs37 consiste en un aumento de los niveles de expresión del gen cat, respecto al parental. Estudios de expresión génica han permitido concluir que la mayor cloramfenicol resistencia presentada por las células que contienen pjs37, viene determinada por el acoplamiento, en dichos derivados, de un nuevo promotor al gen cat. La utilización de dicho promotor permite la síntesis de moléculas de mrna cat en las que están presentes las secuencias necesarias para inducir la expresión del gen cat en presencia de cloramfenicol. Además se ha concluido que la proteína iniciadora de la replicación de pc194 esta directamente implicada en el mecanismo de generación de deleciones a partir de pjs37 en los sistemas de s.Pneumoniae y b.Subtilis.