Identificación de nuevos antígenos para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis visceral

Resumo

Las leishmaniasis son un grupo de enfermedades causadas por un protozoo del género Leishmania, que afectan a más e 14 millones de personas, con 400.000 casos nuevos cada año, actualmente con tendencia a un fuerte incremento por su asociación al SIDA. La leishmaniasis visceral (LV) es una forma extendida por muchas zonas, entre ellas la cuenta mediterránea dónde se debe a L.infantum y puede ser mortal sin tratamiento. Las técnicas serológicas más comunmente aplicadas al diagnóstico de la LV son: la inmunofluorescencia indirecta, ELISA, el Western Blot y el test de aglutinación directa. Estos métodos utilizan como antígenos parásitos completos o extractos solubles de los mismos que presentan problemas fundamentalmente de especificidad. Por ello nos propusimos identificar y caracterizar nuevos genes de L.infantum que codifiquen proteínas antigénicas de interés diagnóstico empleando herramientas de biología molecular y su validación mediante ELISA con sueros de enfermos con LV y otras patologías que suelen presentar reacciones cruzadas con la leishmaniasis. El inmunocribado de una genoteca de expresión de L.infantum nos permitió la identificación de un gran número de clones altamente inmunogénicos, cuyos análisis selectivo mediante Southern-Blot y immuno-dot-blot permitió la elección de seis nuevas moléculas: dos moléculas cuyas secuencias presentaron alta homología con la nucleósido difosfato kinasa (NDPk) y la poli-ubiquitina (pUbq), así como cuatro nuevas moléculas, númeradas arbitrariamente 75, 222, 229 y 241, que no presentaron homologías significativas con las secuencias disponibles en los bancos de secuencias. Las moléculas 75, 222 y 229 están formadas por secuencias repetidas con un alto índice de antigenicidad teórico. Los antígenos recombinantes NDPk, pUbq y 241, y la mezcla de dos péptidos sintéticos, 75R1+222R1, sintetizados a partir de las secuencias repetidas de las moléculas 75