Receptores p2x en neuronas de Purkinje de cerebelo de rata neonatal

Résumé

Las neuronas de Purkinje han sido y son centro de gran interés debido a sus exclusivas características electrofisiologicas y a su importante papel como la única vía de salida de información de la corteza cerebelosa. Considerando que la mayoria de los datos sobre la expresión de mRNA de las subunidades P2X en cerebelo proceden de ratas adultas, decidimos establecer la edad del cultivo en una semana despues del nacimiento del animal (P7), momento en que las neuronas se encuentran en una etapa más avanzada del desarrollo y de ese modo trabajar con neuronas que presenten, en la medida de lo posible, un comportamiento y unas propiedades más proximas a las de las neuronas de Purkinje adultas. Gracias al empleo de tecnicas de electrofisiologia, fluorimetria y biologia molecular, hemos puesto de manifiesto la presencia de receptores nucleotídicos P2X, en cerebelo. En cultivos primarios de cerebelo de P7 se expresan mRNAs para todas las subunidades P2X, salvo la subunidad P2X5. Las subunidades P2X1,P2X2, P2X3, P2X4 y P2X6 se localizan especificamente en las neuronas de Purkinje y forman canales funcionales de estequiometria aun no caracterizada molecularmente. Dichos receptores ionotrópicos P2X son muy permeables a Ca2+ y pueden inducir un aumento significativo de [Ca2+]i incluso sin el concurso de los canales de Ca2+ dependientes de voltaje, por entrada de Ca2+ a través del propio canal P2X. En el estadio P7 existe una población mayoritaria y dominante de receptores P2X2/6, sensibles al antagonista PPADS y potenciados por Zn2+ y acidificación extracelular que corresponde a la formación de receptores heteroméricos por las subunidades P2X6 y las P2X2 y P2X2b, distinguibles por su diferente cinética de desensibilización. La expresión de las subunidades P2X cambia a lo largo del desarrollo el cerebelo. Se producen una sustitución durante la maduración de subunidades P2X2 por P2X4, cuya expresión relativa cambia 90 veces de P1 al es