Estudios genéticos y fisiológicos de la producción del antibiótico microcina b17

Resum

Esta memoria presenta el estudio de la regulación temporal de la expresión de los genes plasmídicos implicados en la producción del antibiótico microcina b17. La síntesis del antibiótico se induce en fase estacionaria y es regulada por el producto ompr. La producción esta determinada por los cuatro primeros genes (mcbabcd) del operon microcina expresados a partir del promotor pmcb. Inicialmente se identificaron los productos génicos de los tres genes mcbb, c y d, como tres proteínas de 29'5, 31 y 45'5 kd. Mediante el aislamiento de fusiones mcb-lacz se ha estudiado la compleja regulación de la expresión de estos genes. Aunque la expresión de todos los genes es activada por ompr, solo están activados en fase estacionaria los dos primeros mcba y b. Los genes mcbc y d no son regulados temporalmente. Se han identificado y caracterizado dos promotores secundarios que podrían justificar las diferencias de regulación. El promotor p2, en mcbc, es constitutivo y asegura el 10-25% de la expresión de mcbd. El otro promotor p3, en mcbd, dirige la transcripción de un rna antisense no traducido en dirección contraria a la del operón. Finalmente el análisis mutagénico del promotor principal pmcb, ha definido una secuencia, a 120 nt del inicio de la transcripción, cuya modificación determina la perdida completa de regulación en fase estacionaria y por el producto ompr. Dada su homología con otras secuencias de promotores también regulados por ompr. Esta región puede estar implicada en este caso en la acción y/o unión del regulador. Este estudio ha permitido establecer un mapa transcripcional de la región de producción y definir algunos de los elementos que intervienen en su regulación.