Clonación del gen de la fructosa-1,6-bifosfatasa de sacharomyces cerevisiae

Resumo

La fructosa-1,6-bifosfatasa (fbpasa) es una enzima gluconeogenica que hidroliza el fructosa-1,6-bifosfato y que en s.Cerevisiae esta sometida a múltiples mecanismos de control como son la represión catabólica y la inactivación catabólica. En este trabajo se ha aislado el gen estructural de la fbpasa de levadura por complementación de un mutante de s. Cerevisiae carente de actividad fbpasa. El mutante se transformo con una genoteca genómica de levadura en el vector episomal pfl 1 y se seleccionaron clones capaces de crecer en piruvato como unica fuente de carbono. En los clones transformados con un plasmido multicopia que contiene el gen fbp 1, localizado en un fragmento de 2,1 kb (xba i-sma i), la actividad fbpasa es aproximadamente cuatro veces mayor que la de una cepa silvestre y sigue estando sometida a represión catabólica. Se ha estudiado la expresión del gen fbp 1, hibridadno rna total de distintas levaduras crecidas en condiciones de represión y desrepresion con sondas internas al gen. Estas sondas hibridan con un mensajero de 1,3 kb, que solo se acumula en condiciones de desrepresion, por lo que presumiblemente la represión catabolica de la fbpasa ocurre a nivel transcripcional. En una cepa de levadura que contiene múltiples copias del gen fbp 1, la sobreexpresión de la actividad fbpasa no afecta a la inactivacion rápida por glucosa, sin embargo produce un enlentecimiento en la inactivación a largo plazo .