Estudio del ensamblaje de microtúbulos en células de mamífero

Resumo

En el presente trabajo se ha caracterizado el efecto de un análogo de colchicina sobre la red microtubular de las células epiteliales ptk2. Dicho análogo, 2-metoxi-5-(2,3,4-trimetoxifenil)-2,4,6-cicloheptatrien 1 ona (mtc), inhibe la polimerización de la tubulina in vitro según resultados previos- se ha observado que produce una despolimerización reversible de la red microtubular de las células ptk2, comprobándose por medio de inmunofluorescencia indirecta y por inmunoensayo, en el que se cuantifila la tubulina polimerizada. Asimismo se ha observado que produce una detención en metafase de la división de estas células. Utilizando fibroblastos de ratón, 3t3.Sv40, se observa este mismo comportamiento, que a tiempos de incubación largos da lugar a la poliploidización de los cultivos. Cuando esta droga se ensaya sobre los leucocitos polimorfonucleares humanos neutroficlos y sobre los linfocitos t citotóxicos de ratón, se observa que la despolimerización de sus redes microtubulares va acompañada de una inhibición de la secreción de los enzimas líticos y de la disminución de su capacidad citotóxica, respectivamente. Finalmente se ha caracterizado el grado de exposición de determinados epitopos de la tubulina, cuando esta se halla polimerizada formando microtúbulos. Para ello se han utilizado anticuerpos antipepptidos sintéticos de diferentes regiones de la molécula de la tubulina, ensayándose sobre los citoesqueletos de las células ptk2 por medio de doble inmunofluorescencia indirecta e inmunoensayo.