Expresión de la ribonucleasa VI de artemia. Nucleótidos inhibidores de la actividad enzimática

Résumé

La actividad ribonucleasa vi de artemia se incrementa bruscamente en el paso de gastrulas enquistadas (quistes) a nauplias, un periodo de baja actividad metabólica. El objetivo de este trabajo ha sido conocer si la actividad de nauplias estaba ya presente en quistes y se encontraba enmascarada por compuestos inhibidores de la actividad de la enzima. Hemos encontrado que extractos de quistes de artemia contienen compuestos con fuerte poder inhibidor de la actividad rnasa vi. La mayor parte son componentes de bajo peso molecular, dializables y sensibles a fosfatasa alcalina y fosfodiesterasa de veneno de serpiente, sugiriendo que se trata de compuestos de carácter nucleotidico. En una exploración de efectores de la enzima entre nucleotidos presentes en artemia hemos encontrado que gp4g es un inhibidor (ki=75um) no competitivo de la ribonucleasa. Ni ap4a ni gp3g son buenos inhibidores de la enzima. Los productos de hidrolisis del gp4g (gmp, gdp y gtp) son también inhibidores, siendo el mas eficaz 5'-gmp (ki=5 um). Entre los mononucleotidos de adenina 5'-amp es el inhibidor mas potente (ki=10um) de la enzima, después de 2'-cmp (ki=1 um), cuya presencia hemos detectado, por vez primera, en extractos percloricos de quistes. La eliminación de los inhibidores presentes en extractos de quistes de artemia por digestión de fosfatasa y fosfodiesterasa tiene como consecuencia un notable incremento de la actividad rnasa. La actividad resultante en quistes es solo una pequeña fracción de la enzima presente en nauplias recién emergidas. Por tanto, el fuerte incremento de la actividad enzimática concomitante con la emergencia de las larvas no se debe a un fenómeno de desenmascaramiento y debe implicar síntesis de novo de la enzima.