Caracterización de los elementos en cis y en trans que median la regulación por insulina del gen del enzima malico citosólico

Abstract

En este trabajo hemos estudiado la regulación transcripcional del gen del enzima málico citosólico (ME) por la insulina, en la línea celular de hepatoma de rata H-35. Mediante ensayos de transfección transitoria hemos localizado la región de respuesta a la hormona entre las posiciones 177 y 102 del promotor. Esta zona contiene un posible elemento de respuesta a la insulina (IRE-II). Por ensayos de retardo en gel hemos demostrado que Sp1 y Sp3 se unen a esta secuencia de manera constitutiva. El tratamiento con insulina induce la unión, rápida y transitoria, del factor de respeusta temprano Egr-1 que desplaza a Sp1 de su sitio de unión al ADN. La inducción de Egr-1 depende de la estimualción de la ruta de Ras/MAP quinasa e inhibe el promotor de ME, lo que podría formar parte de una respuesta mitogénica de las células a la insulina. En una fase más tardía la hormona induce la transcripción del gen, mediante la activación de una ruta bioquímica distinta de Ras/MAP quinasa que podría depender fosfatidilinositol 3-quinasa. En esta respuesta tardía podría participar Sp1, cuya funcionalidad en este promotor hemos demostrado en células de "Drosophila" SL-2. Este factor de transcripción activa la transcripción basal de ME y además coopera con miembros de la superfamilia de receptors nucleares que también regulan este promotor.