Polarización de fluorescencia y rotación brownianaaplicación a macromoléculas biológicas

Resumen

En este trabajo nos hemos propuesto estudiar la difusión rotacional browniana de proteínas solubles mediante las técnicas de despolarización de fluorescencia. Para ello hemos seleccionado y puesto a punto un método instrumental: método de contaje de fotones únicos correlacionados temporalmente. Se ha hecho además un estudio de la posible extensión de estas técnicas al estudio de la zona de tiempos de microsegundos y como aplicación se estudian las características estructurales del fibrinogeno humano en condiciones fisiológicas y en concreto la posible flexibilidad segmental de la proteína. Las técnicas de despolarización de fluorescencia con resolución temporal nos han permitido confirmar la forma alargada de la molécula y demuestran que es improbable la existencia de flexibilidad segmental en la zona 10-1000 ns. Además proporcionan información suficiente para construir un modelo de la proteína esencialmente rígido (en la zona de tiempos citada).