Guanidinobenzoatasaposible marcador tumoral en el melanoma maligno

Résumé

En esta tesis doctoral, la guanidinobenzoatasa es utilizada como marcador tumoral de las líneas celulares de melanoma maligno en cultivo. La presencia de la guanidinobenzoatasa en la superficie celular, se destaca a traves del fluoroforo 9 aminoacridina, por microscopia de fluorescencia. Células normales, que no hayan sufrido la transformación neoplásica, dan una fluorescencia verde-azul al ser teñidas con la 9 aminoacridina, mientras que las células malignas expresan una fluorescencia amarill-naranja. Para facilitar el estudio de la interacción 9 aminoacridina-guanidinobenzoatasa, se ha purificado la guanidinobenzoatasa por cromatografía de afinidad, a partir de la línea de melanocitos malignos A 375. El método de purificación puesto a punto, no solo facilita el estudio de la guanidinobenzoatasa del melanoma maligno, sino que permite detectar trazas de la guanidinobenzoatasa a partir de cualquier fluido biológico, y constituye en sí, un procedimiento de detectar y cuantificar la presencia de la guanidinobenzoatasa, por electroforesis en geles de poliacrilamida. La elevada pureza de la guanidinobenzoatasa obtenida, favorece su estudio por técnicas espectroscópicas: fluorescencia y SERS. Estudiando el mecanismo de la interacción 9 aminoacridina-guanidinobenzoatasa, se ha demostrado que el cambio de fluorescencia de la 9 aminoacridina, se debe a la formación de dímeros/excímeros de 9 aminoacridina en presencia de los centros activos del enzima, tanto en disolución como en la superficie de membrana.#