Implicación de un elemento transponible en la utilización de la lactosa por salmonella virchow

Résumé

La fermentación de la lactosa es un carácter taxonómico importante para la clasificación de las enterobacterias, que se dividen tradicionalmente en dos grandes grupos, lactosa positiva y lactosa negativa. Las principales enterobacterias patógenos(Salmonella, Yersinia y Shigella) son lactosa negativa. En 1994 se detectó en España un brote epidémico en niños menores de 6 meses causado por leche en polvo maternizada contaminada con Salmonella virchow lactosa positiva. En este trabajo se partió de dos variente de la cepa de S. Virxhow 6132, una de ellas descrita como lactosa positiva(6132A) mientras que la otra era lactosa lenta(6132B). La capacidad de fermentación de la lactosa se debe a la presencia del operón lac en los genomas de S. Virchow 6132A y 6132B en copia única. El fenótipo lactosa lento se debe a la presencia de lacA en ninguna de las dos variantes. La caractericación de las regiones colindantes al operón lac en S. Virchow 6132B(14 kb) reveló la existencia de regiones con alto porcentaje de identidad con diversas secuencias de inserción(IS 903 B,IS 1222,isoIS1), una transposasa(Tn5708), y con genes involucrados en la ruta de biosíntesis de las bases pirimidínicas. Se diseñaron ensayos de transposición para determinar si algunas de estas secuencias de inserción podían constituir una unidad funcional tipo transposón compuesto, o si existía una transposón de más de 20 kb que englobase al operón lac. Se obtuvieron trnasconjugantes lactosa positivos que portaban el operón las y la secuencia de inserción IS1222 confirmando la existencia de un elemento móvil en S. Virchow 6132. Al elemento móvil presente en S. Virchow 6132A se le denominó TnlacA y al presente en S. Virchow 6132B, TnlacB. La frecuencia de transposición determinada para TnlacA y TnlacB es de 1.78 x 10-5 y 2.14 x 10-5, respectivamente. Se realizaron diferentes ensayos de transposición utilizando varios construcciones con la intención de d