Mecanismos transcripcionales implicados en la regulación del antígeno linfocitario cd69. Efecto de distintos agentes inmunomoduladores

Resumen

CD69 es el antigeno de activacion linficitario que aparece mas rapido en la superficie celular tras un estimulo. Decidimos llevar a cabo una caracterizacion funcional de su promotor mediante el uso de distintas drogas inmunomoduladores. Inicialmente observamos que el antioxidante PDTC inhibia la aparicion en superficie de la molecula de activacion CD69 en celulas Jurkat T y en linfocitos de sangre periferica activados con PMA e ionoforo, efecto que asi mismo tenia lugar a nivel transcripcional. Al realizar ensayos de cambio de movilidad electroforetica(EMSA) observamos que la accion de este grupo de antioxidantes sobre la capacidad de union de los factores AP-1 y NF-kB de la molecula CD69 a su secuencia de DNA daba cuenta de la actividad transcripcional obtenida en los experimentos de actividad luciferasa. Asi mismo, comprobamos que estos agentes producian un aumento en superficie de CD69 por si mismos, lo que tambien era debido a un efecto a nivel transcripcional. Esta activacion estaba acompañada de un aumento en la unión de miembros de la familia fos y jun a un sitio consenso AP-1 de la region proximal del promotor de CD69. La transactivacion que producia el vector de expresion de c-jun sobre el promotor de CD69 en celulas F9, deficientes en AP-1, confirmo los datos. La mutagenesis del sitio AP-1 no modifico sustancialmente la induccion mediada por PMA mas ionoforo. Mediante EMSAs con oligos solapantes de la zona proximal del promotor, observamos la existencia de tres nuevos complejos inducibles que correspondian a Egr-1/Egr-3,Egr-1 y ATF3/fos. La mutagenesis de los nuevos sitios caracterizados resulto en una perdida parcial de la induccion de Cd69 por PMA mas ionoforo de calcio, mientras que la mutagenesis de los tres sitios a la vez inhibió casi completamente la actividad inducible del promotor. Por otra parte, con el fin de diseccionar la importancia de la ruta del calcio en la inducción de CD69 estudiamos el efecto que tiene la