Expresión y caracterización de la proteína gp5 del virus del síndrome reproductor y respiratorio porcino

Zusammenfassung

La Tesis Doctoral se ha dirigido a la expresión de la proteína GP5 del Virus del Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (VSRRP) en diferentes sistemas y su caracterización. La proteína GP5 está codificada por la ORF5 del genoma del VSRRP, es la glicoproteína mayoritaria de la envoltura del virión y posee epítopos antigénicos implicados en la inducción de anticuerpos que neuralizan la infección por el VSRRP, por lo que es de gran interés para el desarrollo de posibles vacunas frente a la enfermedad. El primer objetivo de esta Tesis se centró en la producción de la proteína GP5 en un sistema eucariota que asegurar las modificaciones postraduccionales de la misma. Para ello se utilizó como vector de expresión un virus de la enfermedad de Aujeszky (ADV) recombinante de fenotipo TK negativo y gE negativo, de similares características a las vacunas atenuadas utilizadas en la actualidad en las campañas de control de la enfermedad. Así se insertó mediante recombinación homóloga la ORF5 de una cepa española del VSRRP bajo el control del promotor de la proteína temprana gG de ADV, en el lugar del gen que codifica la gE del ADV, y se obtuvo el virus PRV7. La expresión de la proteína se pudo determinar por inmunoflurescencia indirecta en células PK 15 infectadas con el virus. Los resultados obtenidos sugieren que el virus PRV7 podría ser utilizado como un posible producto vacunal bivalente frente a las dos enfermedades. Aun así la expresión de la proteína GP5 obtenida en sistemas eucariotas es poco eficiente y esto podría relacionarse, al menos en parte, con la capacidad de inducir apoptosis de la citada proteína dleVSRRP. Así se abordó el siguiente objetivo de la Tesis Doctoral con el fin de estudiar las regiones de la proteína GP5 implicadas en la inducción de apoptosis y obtener mutantes que carecieran de las mismas y no fueran letales para las células para mejorar la eficiencia de la expresión. Par