La atp asa de protones de membrana plasmática de cryptococcus neoformanscaracterización genética y bioquímica

Resumen

Se ha clonado el cDNA del gen de la ATPasa de protones de membrana plasmática de Cryptococcus neoformans var.neoformans. Este tiene una longitud de 3475 pb y presenta un marco de lectura abierto de 2994 pb. La secuencia de aminoacidos deducida presenta un tamaño de 997 aminoacidos, con una masa molecular de 108.682 Da., constituyendo la proteina PMA descrita de mayor longitud. El perfil hidropatico de PMA1 presenta 10 supuestos segmentos transmembrana que concuerda con el modelo de estructura secundaria sugerido para todas las ATPasas de tipo P. En su secuencia de aminoácidos se identifican las regiones conservadas presentas en todas las ATPasas de tipo P. Igualmente, se han identificado la mayoria de los residuos conservados entre las ATPasas transportadoras de protones. La secuencia de aminoacidos de CnPMA1 comparte una mayor homologia de secuencia con la ATPasa de protones de membrana plasmatica del hongo basidiomiceto Uromyces fabae y con las ATPasas de protones de plantas, mostrando una menor homologia con las de hongos pertenecientes o relacionados con la division Ascomycotina. Se ha conseguido complementar una cepa de Saccharomyces cerevisiae defectiva en sus genes PMA1 y PMA2, demostrando asi que el cDNA clonado es una ATPasa de protones de membrana plasmatica. A partir de la proteina expresada de forma heterologa se ha estudiado a nivel bioquimico sus constantes cineticas y se han comparado con las de la proteina PMA de S.cerevisiae. A diferencia de esta ultima, la PMA de C.neoformans parece no activarse por glucosa. Se ha reconstituido la membrana plasmatica con la ATPasa PMA1 de C.neoformans en proteoliposomas. En este sistema se ha estudiado el bombeo de protones por parte de la enzima, probandose que es una ATPasa transportadora de protones susceptible de ser inhibida por el protonoforo FCCP.