Identificación de secuencias genómicas de herpesvirus en patología neurológica humana

Résumé

Los herpesvirus herpes simplex tipos 1 y 2, varicela-zoster, citomegalovirus, herpesvirus humano 6 y el virus de Epstein-Barr son importantes patógenos humanos y son responsables etiológicos de diferentes sindromes neurológicos. Como el resto de los herpesvirus, establecen latencia tras la infeccion primaria y pueden reactivar periodicamente. La gravedad de las enfermedades que producen y su elevada incidencia en los pacientes inmunoeprimidos ha impulsado el desarrollo de tratamientos antivirales y de nuevos metodos diagnosticos, principalmente los basados en la amplificacion genómica. Sin embargo, la frecuencia con la que diferentes virus pueden producir sindromes similares, obliga al laboratorio a dedicar un gran esfuerzo para la realizacion del diagnostico diferencial de la infeccion. Para la deteccion e identificacion simultanea de herpesvirus humanos, se ha diseñado un nuevo abordaje de amplificacion genomica multiple. Para la primera reaccion se utilizan dos mezclas equimolares de oligonucleotidos no degenerados, que alinean en sus extremos 3¿-con una de las dos regiones conservadas seleccionadas de entre las presentes en los genes ADN polimerasa de los herpesvirus y que se extienden en sus extremos 5¿- a secuencias no conservadas y especificas de cada especie viral que se pretende detectar. La elevada concentracion de productos obtenidos tras la primera reaccion de amplificacion, permite el uso de una segunda reaccion de amplificacion multiple, que se diseña de modo que cada herpesvirus produzca un fragmento de ADN de diferente tamaño y utilizando oligonucleotidos que tienen en cuenta la variabilidad natural de cada herpesvirus. Para excluir los resultados falsos negativos, las reacciones de amplificacion multiple incluye, ademas, un fragmento de ADN del herpesvirus porcino 1 y sus correspondientes oligonucleotidos. El metodo se muestra capaz de detectar al menos 10 moleculas de cada ADN de herpesvirus. En estudios inter