Estudio funcional de la regional amino-terminal de hsos1

Laburpena

El factor intercambiador de nucleótidos de guanina de Ras, hSos1, está involucrado en el acoplamiento de los receptores de factores de crecimiento con la ruta de señalización mitogénica dependiente de Ras. La región amino-terminal (NDP) de hSos1 está constituida por un dominio con homología a Dbl (DH),un dominio con homología a pleckstrina (PH), y por una región, que nosotros hemos denominado N-Ter, sin homología conocida hasta hoy. La presente Tesis Doctoral es un estudio del efecto que los distintos dominios que componen esta región amino-terminal (la región N-Ter, el dominio DH, el dominio PH y la región DH-PH) tienen sobre la actividad de hSos1 y la funcionalidad en la activación fisiológica de Ras. Mediante ensayos de formación de focos transformantes, actividad MAPK y estado de activación de Ras, hemos podido determinar que la región completa (NDP), así como la región DH-PH, tienen un papel regulador positivo mientras que la región N-Ter ejerce de regulador negativo; y el efecto de estos dominios sobre la activación de Ras es independiente del tipo de proteína Ras (H, K o N-Ras). Esta región N-Ter, correspondiente a los primeros 200 residuos de hSos1, ejerce dicha regulación negativa mediante una interacción específica con el dominio PH, de tal modo que la región DH-PH queda cubierta. Para identificar proteínas que puedan estar participando en estas regulaciones, por interacción con estos dominios, se ha realizado un ensayo de doble híbrido en levaduras. Así, hemos observado que la región N-Ter interacciona in vitro, in vivo y semi-in vivo (levaduras) con la proteína cGMP-PDE9A (una fosfodiesterasa que hidroliza el segundo mansajero cGMP a su forma no ciclada) y con pA28a (subunidad reguladora del protesoma 26S). Esta región DH-PH también interacciona semi-in vivo con las proteínas pA28b (otra subunidad reguladora del proteosoma 26S), p112 (reguladora del proteosoma 20S) y la caperonina Hsp75.