Clonación de genes nutricionales de cándida albicans y su utilización como herramientas genéticas

Résumé

El aumento de la incidencia de las infecciones causadas por C. Albicans así como la gravedad de estas en pacientes inmunocomprometidos ha hecho necesario abordar el carácter patógeno de esta levadura dimórfica desde nuevos planteamientos, como son los que aporta la Biología Molecular y la Genética. Para ello se requiere desarrollar herramientas que permitan manipular genéticamente este microorganismo, trabajo que comenzó a dar sus frutos en la década de los años 80, sin embargo, hoy se siguen desarrollando y mejorando dichas herramientas por presentar C. Albicvans determinadas características genéticas y que dificultan su manipulación a este nivel. Para la caracterización de los distintos procesos celulares es preciso, entre otras herramientas, construir cepas con marcadores genéticos obtenidas mediante interrupción génica así como mejorar los vectores génicos. Se clonaron los genes nutricionales HIS4 y ARG5,6 mediante complementación, heteróloga y homóloga respectivamente, de mutanes con deficiencias en estas rutas de biosíntesis como posibles marcadores genéticos, y se utilizó el gen HISI con esta misma finalidad. Mediante la interrupción de los genes HISI y ARG5,6 empleando el sistema de interrupción que permite recuperar el marcador de selección(Casete URA3) en la cepa CAI4(ura3 )se obtubieron cepas con dos y tres marcadores genéticos, RM1000 (ura3 ,his1 ) y CNC43(ura3 ,his1 ,arg5,6 ). Estas dos cepas presentan una gran versatilidad, así, la cepa RM100 posibilitó desarrollar un nuevo método de interrupción génica que consiste en interrumpir los dos alelos de un gen en un único paso de transformación empleando distintos marcadores para cada alelo. Por otra parte, la disponibilidad de la cepa CNC43 permitió desarrollar un sistema para demostrar la esencialidad de un gen en un microorganismo diploide como es C. Albicans. El gen ARG5,6 clonado se empleó para la construcción dke una genoteca genómi