Expresión y distribución de las isoformas neuronal e inducible de la enzima óxido nítrico sintasa y de la nitrotirosina en la corteza cerebral de ratas postnatales que sufrieronhipoxia en el momento de parto

Resumen

La hipoxia-isquemia perinatal es una de las causas mas comunes de daño cerebral que origina falta de crecimiento, retraso mental y parálisis cerebral. El óxido nítrico tiene un papel doble en los procesos de hipoxia-isquemia cerebral, neuroprotector porque produce una vasodilatación compensadora y neurotóxico porque es mediador de daño tisular por la formación de peroxinitritos que nitran los residuos tirosina de las proteínas. El óxido nítrico se sintetiza desde la L-Arginina por las enzimas óxido nítrico sintasas de las que se conocen tres isoformas: neuronal (nNOS), inducible (iNOS) y endotelial (eNOS). Para estudiar los efectos de los procesos de hipoxia-isquemia en el desarrollo postnatal de la corteza cerebral de la rata, hemos utilizado un modelo experimental de isquemia intrauterina. Una hembra gestante a término es decapitada y sus fetos permanecen durante veinticinco minutos en el interior del útero materno a temperatura de 37 °C. Las crias se obtienen por cesárea y se mantienen con una hembra nodriza durante los días postnatales P0, P1, P2, P3, P4, P5, P7, P10, P15 y P20. El grupo control procede de crias nacidas normalmente y mantenidas con su madre natural durante las edades postnatales citadas anteriormente. Los cerebros objeto de estudio se obtienen mediante fijación transcardiaca con paraformaldehido para la determinación inmunocitoquimica y sin fijar para realizar las determinaciones de Western blotting y de actividad de calcio. La expresión de las isoformas nNOS, iNOS y de la nitrotirosina como marcador de nitración de las proteínas por la acción del peroxinitrito, se determinó con el uso de anticuerpos policlonales específicos contra nNOS, iNOS y nitrotirosina. La medida de la actividad de calcio se realizó con la determinación de citrulina marcada como compuesto que se produce equimolarmente al óxido nítrico cuando este es sintetizado por las óxido nítrico sintasas. Al comparar las cortezas cerebrales del grupo hipóxico con el control observamos que el primero muestra un incremento en la expresión de nNOS e iNOS entre los estadios postantales P0 y P5 y posteriormente desciende paulatinamente hasta alcanzar una situación similar a la de la rata adulta en el estadio P20. La formación de nitrotirosina es paralela a la de ambas isoformas de la óxido nítrico sintasa. Estos resultados sugieren que la hipoxia en el momento del parto produce un incremento en nNOS, iNOS y nitrotirosina durante el desarrollo postnatal temprano. La expresión de ambas isoformas es máxima en P5 para ambos grupos lo que indica un posible papel del NO en la laminación cortical y en otros fenómenos que tienen lugar durante la etapa postnatal de la rata.