Desarrollo de sistemas eficaces para el cultivo y la identificación de Flavobacterium psychrophilum y Tenacibaculum maritimum

Resumen

En este trabajo de desarrollaron métodos eficaces, rápidos y no tóxicos para el dianóstico de las enfermedades del "síndrome del alevín de trucha arcoris" y "enfermedad del agua fría" causadas por el patógeno de peces Flavobacterium psychrophilum y de la "flexibacteriosis marina" producida por Tenacibacubum maritimum. Se diseñaron sistemas de identificación para ambos patógenos basados en la Reacción en Cadena de la Polímerasa (PCR). Para ello se crearon programas de amplificación cortos y se desarrolló un nuevo método de análisis de los productos de PCR que emplea como colorante el azul de metileno, producto de muy baja toxicidad que sustituye el bromuro de etidio, colorante cancerígeno de uso común. Estos sistemas permiten el diagnóstico directo a partir de tejidos de pez en aproximadamente cuatro horas y la identificación de Flavobacterium psychrophilum y Tenacibaculum maritimum a partir de cultivos bacterianos puros o mixtos en tan sólo dos horas y media. Los sistemas resultaron ser altamente específicos y sensibles, con límites de detección que permiten la detección de los patógenos a partir de peces enfermos y de peces portadores con enfermedad subclínica. Los sistemas se validaron mediante la realización de ensayos de campo y la comparación con otros sistemas de identificación bacteriana. También se diseñaron medios para el aislamiento y cutlivo de F.psychrophilum y T.maritimum. Los nuevos medios Agar Flavobacteriumpsychorophilum (FLPA) y Agar Tenacibaculum maritimum (TMA) fueron los que permitieron un mejor crecimiento y recuperación de los patógenos a partir de peces enfermos en comparación con otros medios evaluados. Además, se demostró que el medio Caldo Flavobacterium psychrophilum (FLPB) es el óptimo para la obtención de antígenos destinados a la producción de vacunas. Los métodos desarrollados durante el trabajo de esta Tesis Doctoral no requieren el uso de productos tóxicos y s