Desarrollo de métodos analíticos para la determinación de corticoides por hplc y aplicaciones

Abstract

En esta memoria se describen las experiencias encaminadas a la puesta a punto mediante rp-hplc de diversas separaciones de mezclas complejas de corticosteroides (cc) con fases móviles convencionales (clc) y micelares (clm). Se inicia el estudio en clc utilizando una columna c18 optimizándose la composición de la fase móvil utilizando el método de glajch, modificándose a continuación otras variables tales como: ph y la fuerza iónica, tipo de columna y temperatura, con objeto de mejorar la separación cromatográfica. Finalmente se evalúan las características analíticas. Dado el interés que presenta la detección y cuantificación de estos compuestos en orina humana se evalúan procedimientos de preparación de muestras (ell y efs). Sobre las bases anteriores se abordan diferentes estudios: I) separación de mezclas que contienen deflazacort y su metabolito. II) separación de dexametasona y betametasona. III) evaluación de los niveles urinarios de cortisol y cortisona en diferentes poblaciones. IV) evaluación de la estabilidad de preparados farmacéuticos. En clm se desarrollan diversos métodos por rp-hplc para mezclas complejas de cc utilizando dos tensoactivos iónicos sds y ctab, empleándose como fase estacionaria una columna hypersil c18 de d.I. 3.2 mm. Se optimizan las separaciones con cada tensoactivo mediante estudio de las variables que les afectan tales como: efecto de diferentes modificadores orgánicos, concentración de tensoactivo, temperatura, flujo, aditivos a la fase móvil. Una vez optimizadas las separaciones de los cc, se evaluaran las características analíticas con objeto de aplicarlas a la determinación de cc en diferentes tipos de muestras (e.G. Cl y cs en orina). Posteriormente, se comparan los resultados obtenidos con los proporcionados por clc.