Efectos biológicos derivados de la degradación de los nucleótidos cíclicos mediante fosfodiesterasas en células eucariontes

Resumen

La presente memoria ha profundizado en el estudio de la actividad biológica de las fosfodiesterasas y los efectos de la degradación de los nucleótidos cíclicos. Se ha caracterizado la fosfodiesterasa especifica de alta afinidad camp de s. Cerevisiae y se ha diseñado un mecanismo de interacción entre el camp y la enzima. Se ha estudiado el mecanismo de inhibición de la proliferación celular por el 8-cl-camp en las líneas celulares cho y molt-4. La 8-cl-adenosina, producida por la acción de las fosfodiesterasas y las 5'-nucleotidasas presentes en el suero al actuar sobre el 8-cl-camp, se comporta como un potente inhibidor del crecimiento. Este efecto desaparece con la ausencia del medio de la 8-cl-adenosina, bien por la adición de la enzima adenosina desaminasa que convierte la 8-cl-adenosina en 8-cl-inosina, o por el bloqueo de la entrada de la 8-cl-adenosina en las células, o por la adición de inhibidores de fosfodiesterasas. Dentro del campo de la biología del desarrollo del organismo dictyostelium discoideum, se decidió clonar el gen que codifica a la fosfodiesterasa especifica de cgmp. El establecimiento de un nuevo método de recuperación de enzimas que degraden cgmp o que sinteticen 5'gmp. El método se basa en la complementación funcional de la cepa bacteriana ght1, que carece de la actividad de la enzima gmp sintetasa, con las genotecas de d. Discoideum o de otro tipo de organismo. Los clones obtenidos mediante esta complementación fueron los correspondientes a las enzimas fosfodiesterasa extracelular de nucleótidos cíclicos y gmp sintetasa de d.Discoideum. Posteriormente la enzima fue parcialmente purificada mediante métodos cromatográficos convencionales.