Estudio de técnicas serológicas y de biología molecular para la cuantificación de la carga viral en pacientes con infección por el virus de la inmunodeficiencia humana

Resumen

Las pruebas que informan sobre el grado de progresión de la infección por el VIH se denominan marcadores sustitutivos: el marcador inmunológico más ampliamente utilizado ha sido el número absoluto de linfocitos T CD4+. Antes de la aparición de las técnicas de amplificación de ácidos nucléicos para cuantificar la carga viral, el marcador virológico indirecto habitual ha sido el antígeno p24 (Ag p24). Sin embargo, este marcador no se detecta en un gran número de pacientes; la sensibilidad de las distintas técnicas de detección/cuantificación de Ag p24 se puede aumentar mediante distintos métodos como el tratamiento ácido de las muestras para la disociación de los inmunocomplejos específicos (IC). En el año 1996 se confirmó la necesidad de introducir la técnica de cuantificación de partículas virales (ARN VIH-1) como potente marcador pronóstico de la progresión de la infección, así como marcador para la monitorización de los tratamientos anti-VIH. OBJETIVOS: 1.- Analizar la eficacia de una técnica modificada de cuantificación de antígeno p24 mediante la disociación de inmunocomplejos. 2.- Analizar la presencia de antígeno p24 del VIH-1 como parte integrante de complejos inmunes circulantes en pacientes VIH+. 3.- Analizar la influencia del tratamiento anti-VIH sobre las técnicas de cuantificación de Ag p24. 4.- Desarrollar y evaluar distintos métodos de PCR para cuantificar ARN del VIH-1 en suero/plasma. Valorar las variaciones biológicas del ARN VIH-1 con distintos métodos de procesamiento y almacenamiento de ls muestras. 5.- Analizar la influencia del tratamiento anti-VIH sobre las técnicas de cuantificación de ARN VIH-1 en suero. 6.- Estudiar las correlaciones entre los niveles de ARN VIH-1, de Ag p24 disociado y sin disociar, de anticuerpo anti-p24 y número absoluto de linfocitos T CD4+. Para ello se han utilizado diversas técnicas: cuantificación de Ag p24 por ELISA antes y después d